磁珠法質粒DNA大量抽提試劑盒(90-100mL)
【貨號】
HA31015
【產品名稱】
磁珠法質粒DNA大量抽提試劑盒 (90-100mL)
【規格】
2次
【產品描述】
本試劑盒可應用于對大量菌液進行質粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩沖液系統。磁珠在一定條件下對質粒DNA具有極強的親和力，當條件改變時可以可逆的釋放質粒DNA，從而達到分離純化質粒DNA的效果。整個操作過程簡便、快速。本產品可最大限度的去除蛋白質等雜質，保證提取所得質粒DNA的純度，所得質粒DNA產物可直接應用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉化等各種下游分子生物學實驗。
推薦每次菌液使用量：高拷貝質粒推薦使用量為50ml，低拷貝質粒推薦使用量為100ml。
本試劑盒可在EP管中進行手動法操作，或者與自動化核酸提取儀配合使用實現自動化高通量操作。
【試劑盒組成】
組分 | 規格 |
① P1 buffer | 100mL |
② P2 buffer | 100mL |
③ P3 buffer | 140mL |
④ 磁珠混懸液 | 60mL |
⑤ Binding buffer | 225mL |
⑥ Wash buffer | 128mL |
⑦ RNase A酶溶液 | 5uL |
【貯存條件】
【實驗步驟】
一、試劑準備
1、 將組分⑦RNase A酶溶液取出2uL加入組分①P1 buffer中，混勻，放置4℃保存備用；
2、 在組分⑤Binding buffer中加入135mL無水乙醇，混勻，室溫保存備用；
3、 在組分⑥Wash buffer中加入512mL無水乙醇，混勻，室溫保存備用。
二、操作步驟
1. 樣品準備
a) 過夜培養的菌液，轉移至50 mL離心管，在離心機的水平轉子上4000 rpm離心10 min，盡棄上清。
b) 將5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL離心管，菌體充分懸浮。
c) 加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），進行裂解。操作時間不能超過5min，防止基因組污染。
d) 再向裂解體系中加入7 mL P3 Buffer，緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），出現絮狀物沉淀。
e) 將中和后的50 mL離心管在離心機的水平轉子上4000 rpm離心20 min。
f) 取出離心后的50 mL離心管，轉移14 mL上清至新的50 mL離心管中。
2. 質粒抽提
a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中。
b) 放置旋轉架上，孵育10 min。
c) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。
d) 加入30 mL Wash buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中，放置旋轉架上，孵育1 min。重復一次。
e) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。
f) 放置37℃培養箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸發完全。
g) 加入500-1mL無菌水溶解，孵育3-5 min。
h) 放置磁力架上，靜置1-2 min，轉移上清之EP管中。
i) 使用分光光度計檢測A260。
【注意事項】
1. 試劑時間長可能會出現沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。
3. Buffer P1加入后一定要充分懸浮細菌，要保證看不到結塊的菌，否則細菌不易被裂解，質粒產量會顯著下降。
4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水?。?7℃）加熱溶解，混勻后使用。
5. 基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。
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