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021-60498804
| Cat. Number | HA11620 |
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| Chemical Name | HA11620 SpCas9 |
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| Qty 1 |
100pmol |
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| Qty 2 | 1000pmol |
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| Storage condition | -20℃ |
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| References | SpCas9 來源于 S. pyogenes 菌株，是依賴于 crRNA 和 tracrRNA(或連接后形成的 sgRNA)引導的 DNA 內切核酸酶，在靶標雙鏈 DNA 存在 PAM(NGG)的情況下，特異地剪切靶標雙鏈 DNA，使 DNA 雙鏈斷裂 并生成平末端。PAM 對于 Cas9 的識別和剪切都是必需的，其剪切位點位于目標序列(target sequence)內， 離 PAM 區 3 個堿基。此外，在 PAMmer 序列存在時，SpCas9 也能特異地剪切單鏈 DNA 或 RNA(詳細信 息請參考 PMID: 24476820；PMID: 25274302)。此酶還可應用于體外靶標 DNA 的剪切、目的片段的克隆等 實驗(詳細信息可參考 PMID: 26323354) 。 產品組成 SpCas9 Nuclease (10 μM) 100 pmol 10 × Buffer 3 1mL Control Target DNA and sgRNA 5 μL 注：1. SpCas9 Nuclease 濃度為 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 規格的總體積為 10 μL，1,000 pmol 規格的總體積為 100 μL； 2. Control Target DNA and sgRNA 應保存于-80℃并避免反復凍融，必須在 6 個月內使用，使用時建議取 0.5 μL 至每 20 μL 反應體系 實驗流程 1. 順式剪切實驗
若用核酸電泳來分析順式剪切產物，對于 20 μL 順式剪切應體系，推薦 target DNA的使用量為 100 ng～500 ng，且 target DNA片段 長度在 300 bp～3 kb 范圍內。不同長度 target DNA 需要的 Cas 酶和 sgRNA 的量需要根據 target DNA 的摩爾量計算，建議保持 Cas 酶:sgRNA:target DNA的摩爾比為 10:10:1，以盡量確保 target DNA被剪切完全。 37℃反應 30 min~1 h，85℃滅活 5 min。核酸電泳分析順式剪切產物。 實驗結果
注意事項 1. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。 2. 因反應需添加 RNA(sgRNA 或者 crRNA:tracrRNA)，整個體系，包括 Cas9 酶都必需不含任何 RNase 活性。本產品經過嚴格質控，無任何其它核酸酶污染。 3. Cas9 酶對熱敏感，容易失活，應全程冰上配置反應體系，使用后立即置于-20℃保存。 4. Cas9 酶與 DNA、sgRNA 形成復合物會影響電泳，需 85℃高溫失活 Cas9 酶后電泳檢測。 5. 本產品僅供科研使用 相關探針產品推薦： HC80202-01 Crispr Cas12a檢測系統用熒光雙標記探針（DNA熒光-淬滅雙標記） 1OD/950元 HC80202-02 Crispr Cas13a檢測系統用熒光雙標記探針（RNA熒光-淬滅雙標記） 1OD/950元 HC80202-03 Crispr Cas13a檢測系統用雙標記探針（RNA Biotin和FAM雙標記） 1OD/1350元 HC80202-04 Crispr Cas12a檢測系統用雙標記探針（DNA Biotin和FAM雙標記）1OD/1150元 HC80202-05 Cas14a檢測系統用熒光雙標記探針（DNA熒光-淬滅雙標記）1OD/950元 HC80202-06 Cas14a檢測系統用雙標記探針（DNA Biotin和FAM雙標記）1OD/1150元 RAA/RPA試劑盒推薦： HP90206-48 RT-RAA核酸擴增試劑盒(試劑條法) 相關Crispr/cas酶： 其他相關蛋白產品： SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His Tag) SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (RBD, mFc Tag) 重組TEV蛋白酶 Recombinant TEV Protease 重組SUMO蛋白酶 Recombinant SUMO Protease 上?；菡\生物科技有限公司自2010年成立以來，一直致力于為客戶提供試劑，儀器設備和耗材一站式服務。目前在蘇州和南通的研發生產基地，專注于體外診斷蛋白，靶標蛋白，工業用酶和細胞因子的生產和定制，按照GMP標準，為工業客戶提供大包裝蛋白原料。 更多產品請聯系惠誠生物！ 蛋白原料網站：www.acediag.com 全國統一服務熱線：021- 60496554 24小時手機服務: 13917250134（同微信）QQ：1715451510 Email：info@e-biochem.com
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