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| Cat. Number | His標簽蛋白純化介質(IDA) |
| Chemical Name | His標簽蛋白純化介質(IDA) |
| Qty 1 |
1ml |
| Qty 2 | 5ml |
| References | 1. 產品簡介 His標簽蛋白純化介質適用于His標簽融合蛋白的純化，采用該產品可快速從細胞發酵液中提取His標簽融合蛋白。 His標簽蛋白純化介質（IDA）以IDA為金屬螯合配基，常規螯合Ni2+（常稱為鎳填料），亦可根據客戶需要螯合Cu2+，Co2+，Zn2+等離子基團。 請注意，選擇該產品時切勿在緩沖液中添加巰基乙醇或二硫蘇糖醇等還原劑，將導致金屬離子脫落（如需要添加還原劑組分，建議選擇NTA產品）。 2. 產品特性
3. 應用 采用His標簽蛋白純化介質對組氨酸（His）標記蛋白質進行分離純化的過程通常包括平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。 平衡：用5~10CV的平衡緩沖液平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。實際操作中，一般選用中性/弱堿性（pH 7~8）的高鹽（0.15~1.0 M NaCl或其它中性鹽）緩沖液。其中常用磷酸鹽緩沖體系，如20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4。對于結合力較強的帶組氨酸標記的蛋白質，平衡緩沖液中可加入低濃度（20~40 mM）的咪唑。 進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或微濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。 為了減少雜蛋白在層析柱上的吸附，可在確保目標蛋白吸附的情況下適當增加樣品緩沖液中的咪唑。對于包涵體蛋白，相應地可在平衡、上樣和洗脫的緩沖液中加入8M 尿素或6M 鹽酸胍。 淋洗：上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線。 洗脫：洗脫一般有兩種方式，一是采用競爭試劑，如咪唑（0~0.5M）、組氨酸（0~0.05M）、氯化銨（0~2M）等將蛋白質從柱子上置換下來；二是減小pH值，洗脫目標蛋白，大多數蛋白質在pH 4~6的范圍內可被洗下來。用競爭試劑咪唑或減小pH值的方法洗脫蛋白質，金屬離子仍結合在柱子上；若用競爭試劑組氨酸或氯化銨洗脫蛋白質，會將金屬離子和蛋白質的復合物一起洗下來。 洗脫緩沖液中必須加入0.15~1.0 M NaCl以消除離子交換作用。梯度洗脫最好在起始平衡液的恒定pH下進行，可采用線性梯度或階越式梯度洗脫。 4. 再生 介質使用5-10次（具體與樣品特性、樣品體積、金屬離子等有關）后，或者鰲合其它金屬離子前，需要進行再生處理。 1）脫Ni 用5-10倍體積的EDTA溶液（0.2M EDTA+0.5M NaCl, pH 7.0）清洗介質，然后用5-10倍體積的去離子水清洗以去除殘留的EDTA。 2）清洗 采用5-10倍體積的0.5-1M NaOH（2M NaCl溶液或50%乙醇或者30%異丙醇）清洗介質，除去色素或者其他強吸附蛋白，然后用10-20倍體積的平衡緩沖液或去離子水清洗以去除殘留溶液。 3）掛Ni 采用2-5倍體積的0.2M NiSO4溶液與介質混合攪拌4h，然后過濾。（亦可柱上清洗） 4）平衡 采用20-30倍體積的去離子水清洗介質，去除殘留的Ni2+。如發現清洗液仍呈現藍色，應繼續清洗，直至藍色消失。
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