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        Cat. Number
        HP80202
        Chemical Name
        HP80202 熒光型RAA 核酸擴增試劑(凍干顆粒)
        Qty 1
        8T
        Qty 2
        48T/685元
        References

        重組酶介導鏈置換核酸擴增(Recombinase-aid Amplification,RAA),是一種恒溫核酸快速擴增技術。RAA先利用從細菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結合,形成重組酶/引物復合體,侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板,在侵入位點重組酶將雙鏈打開,同時單鏈結合蛋白結合到被重組酶打開的單鏈上,維持雙鏈模板處于開鏈狀態。重組酶/引物復合體開始對雙鏈進行掃描,當引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補序列時,重組酶/引物復合體解體,DNA聚合酶結合到引物的3’端,開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板,最終擴增產物以指數級增長,完成靶標基因的擴增。經過熒光標記的探針與擴增產物結合,當探針被核酸內切酶酶切后,與生物素標記的引物共同擴增形成兩端有熒光標記及生物素標記的片段,可用熒光法進行判讀。RAA凍干顆粒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優點,反應組分已混合并冷凍干燥成核酸擴增試劑,操作簡便,易于保存。

        RAA凍干顆粒.png

        訂購信息:

        產品名稱
        產品狀態規格
        熒光型RAA 核酸擴增試劑(凍干顆粒)白色,球形顆粒8T
        熒光型RAA 核酸擴增試劑(凍干顆粒)白色,球形顆粒48T


        檢測原理:

        熒光型RAA凍干顆粒是基于重組酶介導鏈置換核酸擴增(Recombinase-aid Amplification,RAA)技術開發的恒溫核酸擴增檢測試劑,在39~42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的核酸片段,可配合實時熒光進行檢測判斷。


        產品用途:

        熒光型RAA凍干顆??蓱糜诤怂酓NA 的快速擴增。


        儲存及有效期:

        本產品存儲于2~28℃、干燥、避光條件下,有效期為12 個月。


        引物設計:

        RAA核酸擴增技術對引物設計的要求與常規PCR引物設計有一定的區別。由兩條寡核苷酸組成一對引物,分別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列;引物長度在28-35 nt之間,序列中無回文序列、連續單堿基重復序列和內部二級結構區;引物Tm值不作為設計時主要考慮因素。建議在開展RAA(基礎型)擴增反應之前,先進行引物的篩選試驗,以便得到較高的檢測靈敏度。

        探針設計建議方法:探針長度在46-52 nt之間,序列避免回文序列、內部二級結構和連續的重復堿基;探針的5’端用一種抗原標記物標記,通常為FAM基團或羧基熒光素;內部含有堿基核苷酸類似物替換核苷酸(例如四氫呋喃殘基THF-有時稱為'dSpacer');3’末端有聚合酶延伸阻斷基團(例如C3-spacer,磷酸基或雙脫氧核苷酸)。如下圖所示:

        引物設計圖.png

        注意:在開始實驗前檢查探針5’端標記的基團與下游引物5’端標記的基團是否與所用的試紙條相匹配;建議在開展 RAA試紙條型擴增反應之前,先進行引物的篩選試驗,以便得到較高的檢測靈敏度。


        產品說明:

        1. 本產品是“Ready to Use”即用型 RAA 凍干顆粒;含有除引物和探針外所有的反應要素,如重組酶、DNA 聚合酶、逆轉錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。

        2. 試劑盒最低檢測下限為 10-100copies/測試(依據引物篩選優化程度和檢測手段)。

        3. RAA試劑,僅擴增DNA。

        4. 熒光型試劑:含有外切酶(EXO)可使用探針法,進行實時熒光監測。


        適用儀器:

        恒溫金屬浴、恒溫水浴鍋、熒光PCR儀。


        檢測步驟:

        1. 核酸樣本提?。赫垍⒖紓鹘yDNA 提取方法或其他同效商品化試劑盒提取DNA樣本。

        2. 樣本檢測

        2.1 反應體系: 單管反應體系(25μL):

        反應體系圖.jpg

        2.2 操作步驟 

        2.2.1 根據反應數量,按照反應體系配制含有水、上游引物(10 μM)、下游引物(10 μM)的 Mix,混合均勻后加入裝有核酸擴增試劑的檢測單元管中; 

        2.2.2 向檢測單元管中加入經步驟1處理得到的待測RNA樣本;

        2.2.3 再向檢測單元管蓋上加入1.5~2.5 μL 的Mg2+,蓋上管蓋,上下顛倒 輕甩充分混勻5-6次,低速離心10 sec; (注:本步驟“是否充分混勻”將決定實驗結果的重復性) 

        2.2.4 將檢測單元管放入37~40℃ 恒溫金屬?。ɑ蚝銣厮″仯┲?,孵育30min。熒光法則每隔30秒,采集一次熒光信號。 

        2.2.5 試紙條檢測:反應結束后,將25μL反應體系液用無菌水或者PBS稀釋(25μL反應體系液:150μL稀釋劑),利用通用型核酸檢測試紙條進行檢測。


        結果分析與判定: 

        可以根據熒光法判定實驗結果。


        注意事項:

        1. 試劑條檢測,推薦使用免開蓋的裝置進行試紙條檢測,避免氣溶膠污染。 

        2. 開始檢測前請仔細閱讀本說明書全文,并嚴格按照要求進行操作。 

        3.不同類型樣品所提取的核酸含量和純度有差異,可能導致擴增效率不同。 

        4.當實驗室環境、試劑、儀器或配件存在陽性物質(例如質粒、擴增產物等)污染,或樣本間存在交叉污染的情況時,會影響檢測結果準確性,出現假陽性結果。

        5. 務必保證試劑保存、配制或運輸得當,否則可能導致試劑檢測性能下降,出現假陰性結果。 

        6. 陽性對照為質粒,適用于評價本試劑核酸擴增性能。 

        7. 請嚴格按照基因擴增實驗室的管理規范進行操作。 實驗結束后,檢測過程中所產生的廢棄物應按照相關規范進行處理。


        相關產品:

        HP80201 基礎型RAA核酸擴增試劑(凍干顆粒)

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        上?;菡\生物科技有限公司自2010年成立以來,一直致力于為客戶提供試劑,儀器設備和耗材一站式服務。目前在蘇州和南通的研發生產基地,專注于體外診斷蛋白,靶標蛋白,工業用酶和細胞因子的生產和定制,按照GMP標準,為工業客戶提供大包裝蛋白原料。


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